产品货号：
SN0072
中文名称：
AscI限制性内切酶
英文名称：
GenCut AscI Endonuclease
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
酶切位点：
产品特点：
适用范围：
适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
注意事项：
使用方法：
附录参考：
相关搜索：AscI限制性内切酶，AscI内切酶，AscI限制酶，GenCut AscI Endonuclease
GenCut快速内切酶是经过基因工程重组的限制性内切酶，可在5～15分钟内精确完成DNA切割，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。GenCut系列快速内切酶提供一种通用酶切Buffer，简化酶切反应体系；同时具有良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。
酶切位点：
5'…G G↓C G C G C C…3'
3'…C C G C G C↑G G…5'
3'…C C G C G C↑G G…5'
产品特点：
- 5～15min内完成酶切反应。
- 一种通用的酶切Buffer。
- 良好的酶活冗余度。
适用范围：
适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| GenCut AscI | 50μL |
| 10×GenCut Buffer | 1mL |
| 10×GenCut Color Buffer | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
质量控制：
- 功能活性检测：最适反应温度下，在20μL反应体系中，1μL酶能够在15min内完全消化1μg λDNA (HindIII digest)。
- 超长时间温育检测：最适反应温度下，将1μL酶与1μg λDNA (HindIII digest)共孵育3h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，但延长孵育时间可能出现星号活性。
- 酶切-连接-再酶切检测：最适反应温度下，使用1μL酶消化底物，回收酶切产物，在22℃下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接，将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
- 非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将1μL酶与1μg超螺旋质粒DNA共同孵育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒DNA仍然处于超螺旋状态。
- 蓝白斑检测：将含有单一lacZα基因的载体以1μL酶消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG和X-gal的LB培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落，而连接错误（即DNA末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对于GenCut系列限制酶而言，白色菌落比例应小于1%。
注意事项：
- 酶切前建议对PCR产物进行纯化。
- 3h温育未表现星号活性，延时酶切可能出现星号活性。
- 受CpG甲基化影响，序列完全重叠，剪切阻断。
- 所有内切酶的使用体积总和不得超过总反应体系的1/10。
- 失活条件为80℃温育20min。
使用方法：
- DNA的快速酶切
- 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系。
注*：本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×GenCut Buffer加入量可适当减少至2μL。若下一步进行克隆等实验，酶切前需纯化PCR产物。成分 质粒DNA PCR产物 基因组DNA ddH2O 15μL 16μL 30μL 10×GenCut Buffer 2μL 3μL* 5μL 底物DNA 2μL（~1μg） 10μL（~0.2μg） 10μL（5μg） GenCut AscI 1μL 1μL 5μL 总体积 20μL 30μL 50μL - 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
- 37℃孵育15min（质粒），或15～30min（PCR产物），或30～60min（基因组DNA）。
- 80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）。
- 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系。
- 双酶切或多酶切
- 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系。
- 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
- 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
- 每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系。
- 适用于质粒的扩大反应体系
注：如果总反应体系大于20μL，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。DNA 1μg 2μg 3μg 4μg 5μg GenCut AscI 1μL 2μL 3μL 4μL 5μL 10×GenCut Buffer 2μL 2μL 3μL 4μL 5μL 总体积 20μL 20μL 30μL 40μL 50μL
附录参考：
- 不同DNA种的酶切位点数量
λDNA ΦX174 pBR322 pUC57 pUC18/19 SV40 M13mp18/19 Adeno2 2 0 0 0 0 0 0 2 - 甲基化修饰影响
Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI 无影响 无影响 序列完全重叠剪切阻断 无影响 无影响 - 在不同反应缓冲液中的活性
缓冲液 GenCut Buffer Thermo Scientific
FastDigest BufferNEB
CutSmart BufferTakara QuickCut
Buffer活性 100% 100% 100% 100% 活性数据来自百奥莱博限制酶标准反应体系下的检测。 - 同裂酶：PalAI、SBBI。同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
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